产品货号:
YT883
中文名称:
蛋白A/G琼脂糖
英文名称:
Protein A+G Agarose(Fast Flow)
产品规格:
2ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品主要用于免疫沉淀(IP)或免疫共沉淀(Co-IP),也可以用于抗体的纯化。Protein A+G Agarose适合于免疫沉淀所有Protein A Agarose和Protein G Agarose单独可以免疫沉淀的抗体,包括mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA,rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c,rabbit IgG,rabbit和goat polyclonal Abs,以及human IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
Protein A和Protein G都共价交联到4% agarose beads (Fast Flow)上,2mL Protein A+G Agarose中共含有约2mg重组的Protein A+G。2mL Protein A+G Agarose共可以结合约15mg human IgG。推荐的线性流速(Linear flow rate)为50-300cm/h。Protein A+G Agarose配制在TBS溶液中,2mL中共含有0.5mL Agarose beads。
基质 | 4% agarose beads |
结合能力 | 15mg human IgG/2mL |
推荐线性流速 | 50-300cm/h |
含量 | 2mg重组Protein A+G/2mL 0.5mL Agarose beads/2mL |
组分 | 规格 |
Protein A+G Agarose | 2×1mL |
说明书 | 1份 |
保存:2~8℃,有效期1年。
本Protein A+G Agarose如果用于常规的免疫沉淀,可以免疫沉淀100次。
- 请勿冷冻保存本制品。
- Protein A+G Agarose使用前一定要充分重悬,即充分颠倒若干次使混合均匀。
- 从蛋白样品收集开始,所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。
- 免疫沉淀(IP):
- 蛋白样品的准备:
- 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,PBS洗涤一次,然后加入500μL至2mL细胞裂解液裂解细胞。可以使用我司的WB及IP细胞裂解液(货号:YT038)或各种RIPA裂解液(YT609、YT610、YT611或YT612)等进行细胞的裂解。
- 对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
- 对于悬浮细胞,离心收集细胞后,PBS洗涤一次,然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
- 详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材,参考10厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高,可以用裂解液或PBS适当稀释,如果蛋白样品浓度过低,在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
- 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,PBS洗涤一次,然后加入500μL至2mL细胞裂解液裂解细胞。可以使用我司的WB及IP细胞裂解液(货号:YT038)或各种RIPA裂解液(YT609、YT610、YT611或YT612)等进行细胞的裂解。
- 去除非特异性结合(可选做):
- 取200μL至1mL蛋白样品,蛋白量约为200μg至1mg,加入约1μg和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20μL充分重悬的Protein A+G Agarose,4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
- 2500rpm(约1000g)离心5分钟,取上清用于后续的免疫沉淀。
- 所谓种属相同的IgG是指,例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG,则在本步骤中可以加入normal mouse IgG,如无normal IgG可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和normal IgG和Protein A+G Agarose的孵育,可以充分降低非特异性的结合,降低背景。
- 取200μL至1mL蛋白样品,蛋白量约为200μg至1mg,加入约1μg和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20μL充分重悬的Protein A+G Agarose,4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
- 免疫沉淀:
- 加入0.2~2μg用于免疫沉淀的一抗,4℃缓慢摇动过夜。
- 再加入20μL充分重悬的Protein A+G Agarose,4℃缓慢摇动1~3个小时。
- 为方便后续的洗涤操作可以把加入充分重悬的Protein A+G Agarose的量调整为40μL。
- 2500rpm(约1000g)离心5分钟,或瞬时高速离心,小心吸除上清,注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein A+G Agarose。
- 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次,裂解液或PBS的用量每次为0.5~1mL。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤3.c。
- 完成最后一次洗涤后,去除上清,加入20~40μL 1×SDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀,瞬时高速离心把样品离心至管底。
- 100℃或沸水浴处理3~5分钟,取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳,暂时不用的样品可以-20℃保存。
- 加入0.2~2μg用于免疫沉淀的一抗,4℃缓慢摇动过夜。
- 蛋白样品的准备:
- 免疫共沉淀(co-IP):
参考免疫沉淀的方法进行,但免疫共沉淀通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
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